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招標(biāo)代理公司（立即查看） 受業(yè)主單位（立即查看） 委托，于2025-07-28在采購與招標(biāo)網(wǎng)發(fā)布 黎平縣中醫(yī)醫(yī)院消腫止痛方體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證服務(wù)項(xiàng)目采購公告。現(xiàn)邀請全國供應(yīng)商參與投標(biāo)，有意向的單位請及時(shí)聯(lián)系項(xiàng)目聯(lián)系人參與投標(biāo)。 為（略）中藥制劑實(shí)驗(yàn)室制劑建設(shè)，做好院內(nèi)中藥制劑研究與開發(fā)，提高中藥治療水平?，F(xiàn)將消腫止痛方體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證服務(wù)項(xiàng)目采購公告內(nèi)容如下：一、項(xiàng)目名稱：消腫止痛方體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證服務(wù)二、招標(biāo)形式:競爭性談判三、攔標(biāo)價(jià):（略）.（略）四、采購內(nèi)容：（一）材料1.細(xì)胞：人源巨噬細(xì)胞RAW（略）.7。2.藥物：消腫止痛方提物課題組自制。3.試劑與儀器：DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清，0.（略）%胰蛋白酶-乙二胺四乙酸胰酶，雙抗，細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK-8）,TNF-α、IL-6、IL-1β、PGE2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定試劑盒，PIK3（略）、PIK3CB、PIK3R1、PIK3CD抗體，酶標(biāo)儀、電泳儀等。（二）方法1.（略）組與模型制備取出RAW（略）.7巨噬細(xì)胞，將其加入DMEM培養(yǎng)基含（略）%胎牛血清中并置于5%CO2、（略）℃條件下傳代培養(yǎng)。間隔1～2d更換培養(yǎng)液1次，待細(xì)胞完全貼壁且生長至（略）%時(shí)進(jìn)行傳代，重復(fù)傳代培養(yǎng)操作至2～3代后，待其長滿培養(yǎng)瓶壁形成致密單層的細(xì)胞，即可用胰蛋白酶消化液收集細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞（略）為正常對照組、模型組及消腫止痛方提物低、中、高劑量組。正常對照組將細(xì)胞用DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，未施加任何處理因素；模型組予以脂多糖1μgmL,孵育（略）h;消腫止痛方提取物低、中、高劑量組（略）別予藥物浸膏（略）.5,（略）,（略）μgmL,孵育2h,然后加入脂多糖1μgmL進(jìn)行刺激，共同誘導(dǎo)（略）h。2.檢測指標(biāo)與方法消腫止痛方提取物對RAW（略）.7細(xì)胞活性的影響，通過CCK-8實(shí)驗(yàn)來評估消腫止痛方提物對細(xì)胞活性的影響，加入濃度為（略）.5、（略）、（略）μgmL的消腫止痛方提物預(yù)處理2h后，再加入脂多糖1μgmL共同作用，（略）h后用CCK-8法檢測細(xì)胞的存活率。（1）法測定細(xì)胞活性取對數(shù)生長期RAW（略）.7細(xì)胞，以3×（略）個(gè)孔的密度接種至（略）孔板中，每孔（略）μL細(xì)胞懸液，每株細(xì)胞每天檢測3個(gè)復(fù)孔，每孔加入（略）μL完全培養(yǎng)基，放至（略）℃、5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，3d后加入（略）μLCCK8試劑，孵育（略）min,于酶標(biāo)儀（略）nm測定吸光值。（2）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測TNF-α、IL-6、IL-1β、PGE2含量取對數(shù)生長期RAW（略）.7細(xì)胞，以1×（略）個(gè)孔接種于（略）孔板，（略）μL孔。細(xì)胞（略）組及處理同“1.2.1”項(xiàng)。待細(xì)胞孵育（略）h后收集上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定IL-6和TNF-α含量，按試劑盒說明進(jìn)行操作。（3）消腫止痛方提物對PIK3（略）、PIK3CB、PIK3R1、PIK3CD蛋白表達(dá)的影響取RAW（略）.7細(xì)胞接種于（略）孔板，（略）組及給藥同“1.2.1”項(xiàng)，孵育（略）h后，將各組細(xì)胞板放在斜面冰上用RIPA裂解（略）min,離心（略）×g,移上清液，按照B（略）蛋白定量結(jié)果上樣。加入（略）%濃度的聚丙烯酰胺凝膠檢測目的蛋白，再經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳SDSPolyacrylamideGelElectrophoresis,SDS-PAGE后將蛋白轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯PolyvinylideneDifluoride,PVDF膜上，5%脫脂牛奶封閉后，用相應(yīng)的一抗4℃孵育過夜后，用TBSTTrisBufferedSalinewithTween（略）洗2次后，再用相應(yīng)的稀釋好的二抗室溫下孵育1～2h后，用TBST洗3次后，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光顯影。五、提供資料1.有效資質(zhì)營業(yè)執(zhí)照副本復(fù)印件（略）；2.法定代表人（略）復(fù)印件或（略）及委托人（略）復(fù)印件。六、獲取采購文件時(shí)間、地點(diǎn)、方式1.獲取時(shí)間：（略）年（略）月（略）日8時(shí)（略）至（略）年（略）月（略）日（略）時(shí)（略）。2.獲取方式:（略）或（略）、（略）。3.獲取地址：（略）1.時(shí)間：（略）年（略）月（略）日（略）：（略）.地址：（略）1.媒介（略）站2.期限：自本公告發(fā)布之日起3個(gè)工作日。（節(jié)假日除外）九、采購聯(lián)系方式、地點(diǎn)及期限1.聯(lián)系人：（略）?聯(lián)系電話：（略）.地址：（略）3.期限時(shí)間:（略）年（略）月（略）日?----（略）年（略）月（略）日。?歡迎符合采購法第二十二條之規(guī)定的供應(yīng)商（略）投標(biāo)??黎（略）年（略）月（略）日?（略）查看原文